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发布:admin04-26分类: 虎耳草小秘诀

  黄精生长前期要经常中耕除草,每年于4、6、9、11月各进行1次,宜浅锄并适当培土;后期拔草即可。若遇干旱或种在较向阳、干旱地方的需要及时浇水。每年结合中耕除草进行追肥,前3次中耕后每亩施用土杂肥1500千克,与过磷酸钙50千克,饼肥50千克,混合拌匀后于行间开沟施人,施后覆土盖肥。黄精忌水和喜荫蔽,应注意排水和间作玉米。

  [2018-05-15]湖北省黄冈市罗田县三里畈镇虎耳草正值产新期,产地新货陆续上市销售,近期货源走动一般,现产地统货报价在18-20元。(本信息由湖北省罗田县三里畈镇金老板提供)

  IBA、NAA、光质对匍枝筋骨草生长及β蜕皮甾酮含量影响影响,含量,光质,蜕皮甾酮,、NAA、,β蜕皮甾酮,IBA,NAA,NAA、,筋骨草

  肥料的施加时间可以安排在开花之前还有花谢后。2、当它在要开花的时候绝对不可以施加肥料,

  1、用磷酸二氢钾做载体,药液乳化吸附,药肥一体,瓶装冲施和撒施均可,速效性显著,能够快速抑制危害蔓延,并且促进新根萌发恢复植株长势,尤其是针对经济作物重茬老病田块。

  摘要摘要 匍枝筋骨草(Ajugalobata)是唇形科筋骨草属多年生草本植物,研究发现,其中的甾 酮类化合物的13.蜕皮甾酮能够促进昆虫的蜕皮和变态,可作为新型无公害杀虫剂开发利 用。为了保护匍枝筋骨草自然资源,维护生态环境,实现匍枝筋骨草资源的可持续利用发展 和满足人们的需求,通过应用现代生物技术,利用组织培养的方式来生产匍枝筋骨草,并通 过改善环境条件来提高次生代谢产物含量具有重要的实际应用价值。本论文以匍枝筋骨草为 研究对象,开展了以下几方面的研究: 1.用匍枝筋骨草叶片培养获得了组培苗,建立起了良好的扩繁体系。结果表明,采用匍枝筋 骨草嫩叶为外植体,3%NaClO处理10min可达到较好的消毒效果。诱导不定芽增值的最适 培养基为MS+6.BA1 mg/L,增殖率高;诱导愈伤的最适培养基为MS+6-BA mg/L+2,4-D0.4 mg/L,所得愈伤组织大而绿,长势良好;诱导生根的最适培养基是MS+IBA mg/L,所得根系发达,植株健壮。本实验建立了完整的匍枝筋骨草植株再生体系,为匍枝筋骨草的大 规模生产奠定了基础。 2.本实验研究了以喷施清水为对照,采用IBA(0.5mg/L,1mg/L,2rag/L),NAA(0.3 mg/L,0.6mg/1.,0.9mg/L)6种处理对栽培匍枝筋骨草幼苗生长和B.蜕皮甾酮含量的影响。 结果表明: IBA和NAA对匍枝筋骨草的生长具有促进作用。 能够显著提高幼苗总叶绿素含量。 随着IBA和NAA浓度的升高,提高叶绿素含量的程度呈减弱。 除NAA0.3 mg/L和NAA 0.6 mg/L明显降低了可溶性蛋白含量外,其他各处理均能够 提高可溶性蛋白含量,但与对照差异不显著。 除NAA0.3 mg/L对可溶性糖的积累无明显变化外,其他各处理均能显著提高可溶性糖 含量。 IBAO.5 mg/L处理降低了SOD含量,提高了POD含量。NAA0.9mg/L处理降低了 POD含量,IBA1 mg/L处理提高了POD含量。其他各处理对SOD、POD的影响均与对照 差异不显著,对CAT无明显影响。 IBA、NA.A处理的B.蜕皮甾酮含量均随时间的延长而成上升趋势,处理50d后,各处 理后的含量达最高且均高于对照(B.蜕皮甾酮含量为0.8951la g/g),IBA mg/L处理的B.蜕皮甾酮含量最高为1.3765u g/g,明显高于其他各处理。 3.本实验研究了以白光为对照,采用红色、黄色、蓝色和绿色4种荧光灯处理对匍枝筋骨草 幼苗生长和B.蜕皮甾酮含量的影响。结果表明: 红、黄、蓝、绿光都对匍枝筋骨草的生长有不同程度的抑制作用。其中,红光的抑制作 用最小,蓝光次之,黄光、绿光的抑制作用最强。 不同光质对匍枝筋骨草的生长有显著影响,红光、蓝光能显著提高匍枝筋骨草的叶面 积和地上部分的鲜重,但降低植株的株高和叶绿素的含量。而黄光、绿光则减少匍枝筋骨草 东北林业大学硕士学位论文 的叶面积和地上部分的鲜重,而能显著提高匍枝筋骨草的株高和叶绿素的含量。 蓝光可明显提高可溶性蛋白含量,红光处理在45d前可提高可溶性蛋白含量。45d后与 对照差异不显著。黄光和绿光明显降低了可溶性蛋白含量。 红光可明显提高可溶性糖含量,黄光与绿光处理会降低可溶性糖含量,蓝光与对照差 异不显著。 红光、蓝光处理的匍枝筋骨草叶片SoD、POD的活性显著升高,绿光降低了SoD、 CAT、POD含量,黄光降低了POD、CAT含量。 红、黄、蓝、白光处理的0.蜕皮甾酮含量均随时间的延长呈先上升后下降的趋势,45d 时红光处理的匍枝筋骨草叶片13.蜕皮甾酮含量明显高于对照达1.2987u egg,黄光、蓝光处 理的略高于对照,绿光则始终抑制9.蜕皮甾酮的积累。长期处理的各种光质均抑制匍枝筋 骨草叶片13.蜕皮甾酮的积累。 关键词匍枝筋骨草;13一蜕皮甾酮:组织培养;光质;IBA;NAA Abstract Abstract Ajuga lobataisakindofherbaceous perennial.Research showedthatthe 13-ecdysone call urge theinsectstoexuviateand metamorphose.It carlbeusedas newly nuisanceless pesticide.In orderto protect thenatural resources,preserve ecologicalenvironmentandmake Ajuga lobataused sustainably people'sneeds,ithas important practicalvalueto producesecondary metabolites ofAjuga lobata through tissue culture.Ajuga lobatawastakenasthe studyobjectand studieswere carriedoutas following: 1.Thetissueculture seeding gottenthroughculturingAjugalabata leaves,SO propagationsystern wasestablished.Theresultsshowedthatifuse Ajuga labata"s young leavesas explants dealwith3%NaCl0for10minutes,the disinfectioneffectwillbebetter.MS+6-BAlmg/L WaS optimummultiplicationculturemedium.MS+6-BA lmg/L+24-D0.4mg/L wasthe optimum callusculturemedium.ThecallusWaS good growingwell.MS+瑾IA lmg/L Wasthe optimum culturemedium taking roots.Theroot system Wasthriveandthe plant WaS strong.Theexperiment established integralplantregenerationsystem Ajugalobataandlaidthefoundationformass production. 2.Ajuga lobatawereculturedunderdifferentconcentrationofIBAandNAAfor50 days.The experimental resultsshowedthatIBAandNAACanfacilitatethe growth Ajugalobata.ItCall increasethecontentof chlorophyll..Alongwiththe growing ofconcentrationwith IBAand NA~theextentof mcreasing chlorophyUWaSreducecLNAA0.3 mS/L andNAA 0.6mL reducedthecontentofthesoluble protein.Others allincreaSedthecontentofthesoluble peotein. ThereWasnoobvious discrepancyconpaned withcontrast.ThereWaSnoobvious discrepancy accumulationofsolublesugarcompared withcontrast. mA 0.5mg/L reducedthecontentofSOD, butincreasedthecontentofPOD.NAA 0.9mg/L redecedthecontent ofPOD,IBAlmg/L increased thecontentofPOD.OthershadnoinfluenceonCAT.ThereWasnoobvious discrepancycompared withcontrast.Thecontentof p-ecdysolle waS increasing undermAandNAA.Thecontentof ecdysonereachedthe top gothigherthancontrastunderallthe dispose after50 days.mA mg/Lwasbestfortheaccumulationof 13-ecdysonecompared谢廿l contrast.ThecontentWas1.3765 3.Ajugalobatawereculturedunderirradiation、ildifferent lightspectra for90 days.The red light (605um-700nm),bluelight(435nm-480nm),yellowtight(580nm-595nm),greenlight(490 11111- 550nm)andwhite light(380nm一700nm)were used.The experimental resultsshowedthatthere WasdifferentextentofrestrainiIl Ajuga lobata.The growth Ajugalobataunderred light,yellow ligh:t,greenlight andblue light.The extentofrestrainunderred light WaSleast.Andtheblue light tooksecond place.Theyellowlight greenlighthadthe strong restrain.Thered light andblue ..III.. 东北林业大学硕士学位论文 tight callincreasetheleafareaand能Sh weight onthe ground butreducethe hight chlorophyllcontent.111e yellowlight andthe greentight callincreasedthe hight chlorophyllcontentbutreducedtheleafareaand能Sh weight onthe ground.nle blue tight call increasethecontentofsoluble protein.刀把redtight callincreaseitbefore45days。砀eyellowlight andthe greentight reducedthecontent og soluble protein.ne red tight Callincreasethecontentof soluble sugartheyellowtight greentightcanreduceit.Andtheblue tight isnodifferent谢1 contrast.功ered tight andblue nght canincreasethecontentofSODandPOD。the greentight Can reducethecontentofSOD.PODand CAT.n玲yellownght reducedthecontentofPODand CAT..nlered tight wasbestforthe plantsgrowth andtheaccumulationof 13-ecdysonecompared withthewhite tight.m contentwas1.2987 la眈.m accumulationof 13-ecdysone undertheblue tight andthe yellowtight Was higher thanwhite nght.mgreenlight Wasnot 900d forthe growth plantseitherfortheaccumulationof 13-ecdysorle.Longdealing wnderallkindsof lightquality call reducetheaccumulationof 13-ecdysone. Keywords Ajugalobata;peedysone;tissueculture;tightquality;IBA:NAA .IV.. l绪论 1绪论 1-1植物组织培养生产植物次生代谢物质的研究进展 1.1.1植物的次生代谢产物 植物次生代谢(secondarymetabolism)是相对于初生代谢(primarymetabolism)而言 的。初生代谢指包括糖类、脂类、氨基酸和蛋白质以及核苷酸和核酸等合成生物体生存所必 须的化合物。早在1891年Kosse提出了次生代谢这个概念,定义为利用一些有限的初生代 谢产物(primarymetabolites)经不同的生物代谢途径生成的一系列不同类别中间产物和代谢终 产物的过程【。植物次生代谢产物种类比较繁多而且结构迥异,包括酚类、黄酮类、香豆 素、木质素、生物碱、糖苷、萜类、多类皂苷、多炔类和有机酸等。因为植物次生代谢产物 具有很多重要的生物学功能,比如提高植物适应环境的能力,提高抵御天敌侵袭能力,增强 抗病能力,提高植物种间的竞争能力,维系植物与其他生物间的互惠关系等【2一】,所以现在 已经普遍应用于医药、化妆品、化学药品等各个行业。 获取植物次生代谢物质主要有4个途型q一是从天然植物中利用萃取技术进行直接提 取;二是利用细胞工程技术如细胞培养等获得次生代谢物质;三是利用分子生物学手段产生 代谢物质,主要是将代谢过程中的关键酶基因导入到微生物中,并利用微生物发酵来大量产 生次生代谢物质;四是采用化学合成方法进行人工合成。在这4种途径中,植物组织培养和 细胞培养等细胞工程技术生产植物次生代谢物质被认为是目前最有希望的一条途径。利用植 物细胞培养生产次生代谢产物有以下4个优点:(1)不会因为地理、气候等条件的影响受到 限制,同样具有合成次生代谢产物的能力:(2)由于结构比较疏松,容易分散,因此更易于 固相与液相培养,使工业化生产易于实行;(3)可以节省土地面积,降低实验与生产成本并 且缩短生产周期;(4)在了解次生代谢过程的基础上,可以调控次生代谢过程,比如调控培 养条件、添加代谢前体以及采用诱导子。因此,采用细胞培养来提高药用有效成分以及调控 次生代谢工作是一项很有应用前景的探索性工作,甚至可以认为这是解决各种濒于灭绝的珍 稀名贵药用植物药材资源的主要途径网。自20世纪30年代以来,已经对近1000种植物进 行在细胞培养方面进行了研究,对400多种植物细胞进行在悬浮培养方面进行了研究,并从 中分离获得600多种次生代谢产物,其中大概60多种在含量上超过或接近原有植物,约20 种以上超过干重的l%。生产的次生代谢物已超过500种,包括药品、化妆品、食品、香 料、色素和杀虫剂等。其中包括比如长春碱,地高辛,东蓑若碱,山蓑若碱,小粟碱和奎宁 等等临床上广为应用的药物。很多重要的药用植物比如长春花、人参、紫草、西洋参和黄连 等植物的细胞培养都获得了成功。 1.1.2植物次生代谢产物的调控 提高细胞的生物量和增加产物的积累是提高次生代谢产物的产量所包括的两个方面。然 东北林业大学硕士学位论文 而,细胞生物量的提高与产物的积累又并不总是十分统一的。很多研究显示,生长迅速并且 未分化的细胞培养物一般不会积累或很少积累次生代谢产物,而次生产物的合成又通常需要 某种程度的形态和生化上的分化。所以,要综合考虑这两方面的因素才能提高次生代谢产物 的产量。 影响植物组织和细胞培养过程中植物次生代谢产物产生和积累主要有以下5个因素: (1)生物因素的影响:比如外植体的选择、细胞系的筛选、接种量的多少、细胞分散的程 度、细胞生长的状态、细胞组织分化的程度、毛状根的培养和冠瘤组织的培养、细胞同步化 等;(2)培养基的基本组分的影响:无机盐、碳源、植物生长调节剂等;(3)培养基中附加 物质:如合成目标次生物前体物质、其他有机物、代谢抑制剂、各种诱导子、渗透剂等; (4)培养条件:温度、光、通气、pH、转速、剪切力和渗透压等;(5)培养方式改进:如 固定化培养、二步培养、两相培养、产物转移、微胶囊化培养等。如工业化生产还与培养罐一 类型、通气状况、搅拌等有一定的关系。这些因素都能显著的影响植物细胞中活性成分的含 量,所以,应该综合以上几个因素方面考虑,来刺激植物细胞的产生和增加活性成分。下面 主要从植物生长调节剂和光质两个方面来介绍其对植物次生代谢产物积累的影响。 1.1-2-1植物生长调节剂对植物次生代谢产物的影响 除了营养物质以外,为了促进细胞的生长和次生物质的积累,通常还有必要在培养基中 加入一种或几种生长调节剂,这些物质能在低浓度下,对植物生理过程进行调节。添加外源 激素对于植物细胞生长、分化以及次生代谢物的调控具有重要作用。适宜配比和浓度的生长 素和细胞分裂素,能促使细胞保持分裂的状态和一定的分裂频率。 添加不同种类和不同浓度的外源激素来对组织培养物的生长和次生代谢进行调控己成为 细胞培养过程的重要手段,主要有细胞分裂素和生长素两大类。生长素和细胞分裂素的种类 与浓度以及二者之间的比例对培养植物的细胞生长和次生代谢产物合成有重要的作用。细胞 培养中常用的生长素有L气A、NAA、2,4-D、BA,细胞分裂素有6-BA、KT、ZT等。已经 证实2,4-D会抑制许多植物细胞培养生产次生代谢物质,比如添加24-D后,长春花、毛曼 陀罗、天仙子、颠茄、罂粟等细胞培养物不产生生物碱;在桔叶鸡眼藤悬浮培养物中添加 NAA会促进葸醌的产生,添加2,4_D则完全抑制蒽醌的合成;而添加NAA在紫草愈伤组织 中则会抑制紫草宁的生成【6】。细胞分裂素根据代谢类型和相应的植物种类的不同也起着不同 的作用,比如KT能够促进Haplopappusgracilis中花青素的合成而抑制杨属植物中花青素的 合成,高浓度的KT能抑制紫花曼陀罗(Daturamtula)愈伤组织中生物碱的生产,而促进马氏 山莨菪(Scopolia,,z甜拥口)培养物中生物碱的生产【71。另外,不同浓度的分裂素和生长素组合 对愈伤组织诱导及继代分化等时期的作用也有很大区别,单独使用2,4-D,KT或KT与IBA 组合都不能诱导银杏幼叶产生愈伤组织或诱导频率很低;而使用NAA与KT或6-BA组合 比较适合诱导幼叶产生愈伤组织[81,添加6-BA和24-D在继代培养过程中,诱导的愈伤前期生长较快,但继代后易发生褐变【91。其他激素中GA3能够抑制胡萝卜属植物悬浮培养细胞 中黄酮类化合物的合成【101,乙烯能够明显促进欧亚唐松草培养中小檗碱的生成,赤霉素和 脱落酸在很多植物细胞培养中均有抑制作用。 1绪论 1.1.2.2光质对植物的生长和次生代谢产物的影响 叶片是植物进行光合作用的主要器官,改变光质会直接影响叶片的生长。在相同光强 下,通过不同光质对草莓生长发育的影响发现,与对照相比,绿膜和红膜更有利于草莓植株 叶柄长度和叶面积的增加,而蓝膜处理后的叶柄长度和叶面积明显较低【11】研究显示,蓝光 能够降低植物体内的L~A水平而抑制植物的生长;红光对植物子叶的伸长有促进作用,对 茎的过度生长有抑制作用【12】;紫外光会造成植物叶片PSII反应中心失活、光合速率和羧化 效率降低【131。魏胜林在菊花上的研究表明:蓝光对菊花单株总叶面积和总茎长的增加有促 进作用;而红光则抑制【14】。蓝光处理对叶绿素含量和净光合强度具有促进作用,而红光处 理则起到抑制作用。 光质对次生代谢的影响较为复杂,不同波段光对不同种类的次生代谢物质积累的影响不 同,相同波段的光对同一类次生代谢物质的影响在不同植物的表现不同。简而言之,植物受 光质的影响变化因品种而异;同时,单色光与组合光的影响效应也存在一定程度的差异,不 同光质对植物有效成分积累的影响是不同的,红光对植物体内碳水化合物的积累有促进作 用,而蓝光对蛋白质的含量积累有促进作用【151。赵德修等【161研究了在水母雪莲的组织培养 中,蓝光能够最为有效的促进愈伤组织中黄酮的合成,远红光和白光次之,红光处理后黄酮 含量最低,不同光照组合的结果显示,每天1611蓝光与8h白光组合和8h蓝光加16h白光的 组合,能使够从母莲愈伤组织中获得最高的黄酮含量和黄酮生产率。郑珍贵【l刀等研究显 示,在液体培养基上培养长春花激素自养型细胞系,红光比蓝光更有利于合成长春花阿玛生 物碱。野外和温室的光质处理实验表明,红膜对根的生长抑制程度最小,而对红景天甙含量 的提高最多。关于光质对于芥子油苷含量影响的报道主要集中在红光和蓝光上。测定生长在 有色塑料板反射光下的芜菁中芥子油苷含量,表明在蓝色板下生长的根中芥子油苷含量高, 更辛辣【18】。蓝光可能通过相应受体调控黑芥子酶调节体内芥子油苷代谢【191。另外,在水芹 菜的研究中表明,与正常的光照对比,在红光下,水芹菜中的主要芥子油苷葡萄糖豆瓣素 (ghlc伽astI硎in)含量增多刚,可能是红光调节光敏色素作用的结果。 1.1.3植物的次生代谢产物与植物源农药 到目前为止,防治害虫的主要手段是依靠化学农药,虽然化学农药给人类创造了巨大的 财富,但同时也给环境造成了极大的危害,比如病虫、杂草的抗药性增强,环境遭到污染 等。所以,当前的重要研究方向是要有效地开发低毒、安全、无公害的植物保护剂。植物次 生代谢产物是植物通过次生代谢途径产生的化学物质。植物在长期的协同进化过程当中,通 过次生代谢途径产生植物次生性代谢物质以抵御病虫害的侵入,通过植物次生性代谢产物抑 制其他物种的生长,从而在竞争生长过程中处于相对有利的地位【2l忽】。植物中的次生代谢物 从性质来看,通常分为:苯丙素类、醌类、黄酮类、单宁类、萜类、甾类及其甙类、生物碱 等七大类。其中有很多种次生代谢物质具有杀虫、抑菌或除草的活性。到目前为止,已经查 明的对昆虫起防御作用的次生物质超过3000种,其中多数为黄酮类、萜类和固醇类化学 物。这些物质对昆虫的化学防御主要是忌避作用、抑制取食、抑制生长发育、激素效应、毒 东北林业大学硕士学位论文 杀作用等田l。植物源农药的开发主要是利用植物体内的次生代谢物质。我国学者对植物源 杀虫剂的研究一般集中在楝科、卫矛科、柏科、豆科、菊科、唇形科、蓼科等植物及其精油 上,对植物中杀虫活性成分的分离鉴定、毒力测定、作用机理和作用方式等均进行了较为系 统的探讨。例如,从黄杜鹃花(Rhododendronmolle)中分离的四环二菇化合物对斜纹夜蛾 (Prodenialitura)和甜菜夜蛾(Spodopyerae耐gua)等具有强烈的拒食和毒杀作用瞄】。国外研究 较多的有印楝(AzadirachtaindicaA.Juss)、番荔枝(Annonasquamosa)、万寿菊(Tagetes erectaL.)等植物。 1.2匍枝筋骨草概述1-2-1匍枝筋骨草的生物学特性及资源分布 匍枝筋骨草(Ajugalobata),唇形科,筋骨草属。多年生草本,具匍匐茎,主茎矮,高一~一7.12cm,直立,通常由中部叶腋抽出1侧枝,枝条伸展,呈匍匐状,节间长约6em,逐节 生根,被淡棕色具节长柔毛或疏柔毛。叶柄长2-4cm,近茎基部者可长达5锄:叶片薄纸 质,圆形或椭圆状圆形,长2.2.5em,宽1.8-2.4em,先端圆或钝,基部心形或近截形,边缘 具不整齐的浅圆齿,具缘毛,两面被疏糙伏毛,下面以脉上为多,下部的叶片通常略带紫 色:苞叶与茎叶同形。花通常单生于茎顶端苞叶腋内;花梗3-4mm。花萼钟形,长约 5mm,基部前方通常稍膨大,具10脉,萼齿5,卵状披针形或宽披每-t-形,长为花萼长的1/2 或略长,几整齐,仅后方1齿稍短,先端略钝,边缘具缘毛,内面无毛。花冠紫色或红紫 色,筒状,直伸,长13—15mm,外面被短柔毛,内面被微柔毛或几无毛,基部前方略膨 大,无毛环,冠檐二唇形,上唇极短,直立,半圆形,顶端微凹,下唇极大,伸长。3裂, 中裂片扇形,中间深裂,侧裂片长圆状披针形,靠近中裂片。雄蕊4,后对略短,均伸出花 冠,花丝挺直,略被疏柔毛或几无毛,花药肾形,贯通为1室,横裂。花柱露出于花冠,略 超出雄蕊,无毛,上部微弯,先端2浅裂,裂片细尖。花盘环状,前方呈指状膨大。子房4 裂,几无毛或被极疏的微柔毛。小坚果卵状三棱形,长约2mm,背面具明显的网状皱纹, 腹面具1大果脐,几占腹面的4/5。花期4—5月,果期5.7月。 产云南西北部,西藏东南部:生于密林下,海拔1500-3000m。尼泊尔,锡金,不丹, 印度东北部,缅甸北部也有。 1。2.2筋骨草属植物的主要化学成分及药理作用 筋骨草属植物全株可作为药用,具有清热邪、解热毒、消肿、止痛、解热血、降血压的 功效,可用于治疗呼吸系统、消化系统、肝胆、眼科以及外伤等疾病。比如呼吸道疾病扁桃 体炎、肺炎、咳嗽、伤风感冒等;消化道疾病肠炎、腹泻、痢疾、阑尾炎等;肝胆疾病如肝 炎、黄疸、胆囊炎;眼科疾病如目赤肿痛、结膜炎、胎毒黄染等;外用治疗跌打损伤、骨 折、外伤出血、乳房炎、烫火伤、毒蛇咬伤、疯狗咬伤、痈疽疔疮等124]。到目前为止,黄 酮类、甾体类、苷类、二萜类、糖类等化合物已经从筋骨草属植物中分离获得,其中甾酮类 化合物目前主要在该属筋骨草组植物中发现。 1绪论 甾酮类化合物具有抗肿瘤、利胆、促红细胞生成以及降血脂和降血糖的作用,比如蜕皮 甾酮类化合物杯苋甾酮,对胆汁分泌具有显著的促进作用,能够增加胆汁中的胆酸及胆红素 含量并且降低胆固醇含量瞄】。蜕皮激素对核酸和蛋白质的合成具有促进作用,并能够影响 糖类代谢和脂类代谢,影响中枢神经系统和免疫调节等。日本最早将蜕皮激素在养蚕业上应 用。1969年Nakanishi在蚕的饲料中添加百日清甾酮A,在蚕第4次蜕皮后的第4天添食 0.5~1 p头的百日青甾酮A,12h后,100%的蚕地吐丝结茧。除此以外,日本还有人利用 保幼激素与B.蜕皮激素协同使用,实验显示可以达到增加茧量的作用【261。我国蚕业科学界 随后也开展了这两类激素在桑蚕上的应用研究,将蜕皮激素应用于养蚕业,规模远远超过了 日本。还将蜕皮激素应用于其他养殖业。比如将蚕蛹喂饲小鸡会促进小鸡生长。用蜕皮激素 刺激虾,能够明显促进虾体内蛋白质的合成。如今已经有人将蜕皮激素应用于蟹虾养殖来提 高产量。蜕皮激素还可以用来防治害虫。蜕皮激素能够促进昆虫的蜕皮和变态。高剂量的蜕 皮激素能够扰乱昆虫体内的正常代谢过程,使昆虫提早蜕皮或变态而成为微小成虫或畸形个 体。昆虫对蜕皮激素相当敏感,轻者可以引起昆虫不育,重者可以导致昆虫死亡。国外学者 早就发现了外源蜕皮激素能杀死昆虫,因而提出了将蜕皮激素用作杀虫剂的问题。合成保幼 激素作为第三代农药在国外早已广泛应用,但蜕皮激素由于其来源的限制、未能在农业上用 作杀虫剂推广。 苷类成分的苷元有环烯醚萜和二萜类,环烯醚萜苷类化合物8一乙酰基哈巴苷能够抑制 肿瘤细胞生长促进剂诱导产生的病毒早期抗原,有潜在的抗肿瘤活性,可作为抗肿瘤药物使 用【27】。二萜类成分具有抗菌、抗分支杆菌、抗真菌、抗虐、降血糖以及抗癌的作用【28】是该 属植物的主要特征成分;此外二萜类成分对昆虫具有拒食作用,比如Ajugarin jugarinII以及Ajugarinm是中等强度的拒食剂【29】。研究表明,筋骨草属植物中,黄酮苷类具有止咳化痰,解除咽喉肿痛的作用[241,其中木犀草素可显著减轻IgA肾病大鼠尿蛋白 的排泄、肾小球中IgA沉积的产生[303l】能有效降低蛋白尿、保护肾功能,其降脂作用优于雷 公藤多苷,且无明显肝损害【32】。 1.2-3筋骨草属植物的杀虫作用研究概况 筋骨草属植物不仅是优良的中草药资源,也是植物杀虫剂资源。迟德富等人研究发现: 从多花筋骨草、多花筋骨草短穗变种、多花筋骨草莲座变种和线叶筋骨草中提取蜕皮激素类 似物,并稀释成一定浓度,将新鲜枝条在提取液中培养,然后在室内接种桃蚜、柳沫蝉、糖 槭盔蚧等,昆虫通过刺吸取食后,对其生命活动产生了很大影响,多数提取液的25或50倍 液对柳沫蝉的杀虫率都在90%以上,但对其寄生性小蜂的羽化率和捕食性天敌异色瓢虫存 活状况影响不大【33】。有研究表明,对舞毒蛾、天幕毛虫和树粉蝶幼虫这几种鳞翅目幼虫采 取浸枝叶饲养的方法,发现多数提取液对这些幼虫的杀虫效果均在90%以上,对其生长发 育影响较大刚。从不同时间不同地区多花筋骨草中提取植物源蜕皮激素类似物对杨千橡的2 龄幼虫通过添加饲养的方式进行了测试,发现开花前期采集的多花筋骨草全株比花期和开花 后期采集后的全株提取液更有作用,死亡率达65.22%。根部提取物死亡率达100%,高于茎 东北林业大学硕士学位论文 部和叶片【巧】。 1.3本研究的目的和意义 目前对筋骨草属植物的研究主要集中在提取分离、成分鉴定、活性成分应用,以及医药 应用研究等。对匍枝筋骨草进行组织培养及次生代谢产物的代谢调控的研究尚未见报道。随 着药物需求的急剧增加,生物农药的供不应求,造成了对天然资源的掠夺性开发,使得匍枝 筋骨草资源面临枯竭。应用现代生物技术,利用组织培养的方式来生产匍枝筋骨草次生代谢 产物,既可以满足对匍枝筋骨草的需求,又可以保护自然资源,维护生态环境,不仅不受田 间条件制约,而且用该方法生产植物蜕皮激素次生代谢产物具有生产周期短、效率高、对环 境无污染等特点,因此以植物蜕皮激素类似物为目标产物的细胞或组织培养技术可以为该资 源的有效合理利用奠定良好的基础。植物次生代谢会受到多种生物及非生物因素的影响,只 要我们掌握了各环境因子对其影响规律,就可以通过改善环境条件来提高次生代谢产物含 鉴于以上种种因素,本论文开展了生长调节剂和光质对匍枝筋骨草生长及蜕皮甾酮含量影响的研究,目的在于明确匍枝筋骨草成分与生长调节剂和光质的相关性,从而为人工栽培 匍枝筋骨草如何提高药用成分含量、以缓解野生匍枝筋骨草资源的严重破坏积累基础资料。 2材料与方法 2材料与方法 2.1匍枝筋骨草组培体系的构建 2.1.1试验材料 购买于2009年4月浙江省杭州蓝天园林种苗公司余姚镇基地,经东北林业大学林学院 植物教研室黄普华教授鉴定为匍枝筋骨草。 2.1.2方法 2.1-2.1培养基及培养条件 初始培养基:MS+6-BA1 mg/L+NAA 0.2 mg/L:增殖培养基:MS+6-BA(O,0.5, 1,1.5,2 mg/L);愈伤培养基:MS+6-BA 1mg/L+2,4_D(O,0.2,0.4,0.6,0.8,1 mg/L);生根培养基:MS+IBA(O,0.5,1,2mg/L)/NAA(0,0.3,0.6,0.9mg/L);移栽 基质为蛭石:土=1:1。上述培养基均加入蔗糖20g/L,琼脂5.6g/L,p14值调至6.5。培养条 件为培养室内光照培养,温度为25,光/暗周期为16198 h,光照强度2000lx,湿度为 70%。2.1.2-2外植体消毒 将叶片用自来水冲洗数次,在超净工作台上用75%酒精消毒30s:无菌水冲去残留酒 精;用3%NaCl0溶液对叶片进行消毒,消毒时间分别为5min,10min和15mini无菌水 冲洗3.5次;将消毒后的叶片切成1em2大小,然后接种于初始培养基上培养。 2.1.2.3诱导愈伤组织 将初始培养成活转绿的外植体接种到诱导愈伤培养基上,每种培养基接种15瓶,培养 28d,重复3次,观察愈伤组织诱导情况。 2.1.2.4腋芽增殖培养 将诱导出的腋芽接种到增殖培养基中,每种培养基接种20瓶,培养28d,重复3次, 观察增殖情况。 2.1.2.5生根培养 选取同代继代培养、生长一致的丛生芽分成单株,接种于生根培养基中。每种培养基接 种15瓶,培养28d后,观察生根状态,统计生根率。 2.1.2.6移栽 当根系长至1.5.2gill以上,培养室内将瓶盖打开,通风炼苗5d,取出小苗洗去根部培 养基,然后移栽到已消过毒的基质中,保持遮阴培养。10d后统计成活率,苗生长情况。 东北林业大学硕士学位论文 2.2 IBA、NAA、不同光质处理对栽培匍枝筋骨草生长及蜕皮甾酮含量的 影响 2-2.1试验材料与药品 试验材料以移栽苗为材料,栽植于盛有充分混匀的介质花盆中,每盆一株,恢复生长后 开始进行试验。 表2.1试剂与生产厂家 Tab2-1 Reagent andtheirmanufacturer 药品与试剂 生产厂家 丙酮 考马斯亮蓝G250 牛血清蛋白BSA 蔗糖 蒽酮乙酸乙酯 浓硫酸 核黄素 石英砂 三氯乙酸 磷酸氢二钠 磷酸二氢钠 西陇化工股份有限公司 上海晶纯试剂有限公司 北京奥博星生物技术有限责任公司 天津市恒兴化学试剂制造有限公司 天津市永大化学试莉有限公司 哈尔滨市新春化工产品有限公司 天津市科密欧化学试剂有限公司 天津石英钟厂霸州市化工分厂 上海市科丰化学试剂有限公司 天津市恒兴化学试剂制造有限公司 天津市天河化学试剂厂 2.2.2方法 2.2.2.1IBA、NAA处理 以喷施清水为对照,设IBA(0.5,1,2mg/L),NAA(0.3,0.6,0.9rag/L)rag/L)7种处 理,3次重复,每个处理30株,将溶液喷施于植物茎、叶生长部位。每个处理喷施lL,处理 后每7d进行一次取样及各项指标测定,取幼苗叶片做各项生理指标测定,取全株进行蜕皮 激素含量测定,共测定5次,每个处理3个重复。 2.2.2-2IBA、NAA处理 不同光质处理 以白光(380-700nm)为对照,设红光(605nrn-700nm)、黄光(580nm-595nm)、蓝光(435nm- 480nm)和绿光(490 ll_rfl一550nm)4种荧光灯进行处理。培养条件为温度30-M,光/暗周 期12h/12h,湿度70%。取幼苗顶端完全展开的第一片成熟叶片做各项生理指标测定,取 地上部分进行蜕皮激素含量的测定,每15d进行一次取样及各项指标测定,共测定6次,每 个处理5个重复。 2.2.2-3各项指标的测定 生物量:电子天平精确称量幼苗的鲜重,用直尺和游标卡尺测定株高,叶面积测定仪测 2材料与方法 定叶面积。 叶绿素的测定:参照丙酮提取比色法。取幼苗顶端完全展开的第一片成熟叶片,称重后 放入研钵中,加入2mL纯丙酮研磨成匀浆,倒入5mL离心管中,用80%丙酮定容至 4mL,2000r/min离心10min为色素提取液。取色素提取液0.2mL,加入80%丙酮定容至 5ml,倒入比色皿中,以80%丙酮为对照,用紫外可见分光光度计分别测定663nm、646nm 及470nm处的OD值,测定时重复3次,计算出总叶绿素含量及叶绿素A与叶绿素B的比 可溶性蛋白含量的测定:参照考马斯亮蓝比色法。取幼苗顶端完全展开的第一片成熟叶片,称重后放入研钵中,加入2mL蒸馏水研磨成匀浆,将匀浆倒入到离心管中,然后用 6mL蒸馏水分3次洗涤研钵,全部倒入离心管后,静止0.5.1h以充分提取,然后4000r/min 离心20min,弃掉沉淀,将上清液倒入10mL容量瓶中,用蒸馏水定容后为样品提取液,待 测。取样品提取液1.0mL放入带塞的试管中,加入5mL考马斯亮蓝G-250溶液,充分混合 后放置2min,倒入比色皿中,用可见分光光度计测定595nm下吸光度,测定时重复3次, 计算并通过标准曲线查得蛋白质含量。 可溶性多糖含量的测定:参照葸酮法。取幼苗顶端完全展开的第一片成熟叶片,称重后 剪碎混匀,加入5.10mL蒸馏水后用塑料薄膜封口,在沸水中加热30min,加热2次,将提 取液过滤,倒入25mL容量瓶中,再用蒸馏水反复漂洗试管和残渣,并定容至25mL得样品 提取液。吸取样品提取液0.5mL于20mL刻度试管中,加入1.5mL蒸馏水,0.5mL葱酮乙 酸乙酯和5mL浓硫酸,充分振荡后立即将试管放入沸水浴中,保温lmin,取出后自然冷却 到室温,以空白为对照,用紫外可见分光光度计测定630nm波长下的吸光度,测定时重复 3次,并计算可溶性糖含量。 超化氧歧化酶(SOD)i贝IJ定:参照氮蓝四唑(NBT)法。取幼苗顶端完全展开的第一片成熟 叶片,称重后放入预冷研钵中,加入预冷pH=7.8磷酸缓冲液2mL,在冰浴下研磨成匀浆, 用磷酸缓冲液冲洗研钵,定容至10mL,在4下10500r/min离心20min,所得上清液为 SOD粗提液。取4支10mL试管,2支测定,2支对照,分别加入0.05mol/L磷酸缓冲液 1.5mL,130mmol/LMet溶液0.3mL,750pmoVL NBT 0.3mL,1009mol/LEDTA-Na2 0.3mL, 1001maol/L核黄素0.3mL,蒸馏水0.5mL,充分混匀后,在40001x的均匀荧光灯下显色 20min,在黑暗下终止反应,在对照管中以磷酸缓冲液代替酶液进行不照光处理为空白对 照,用分光光度计测定560nm处的吸光值, 测定时重复3次,SOD活性单位以抑制NBT 光还原50%为一个酶活单位。 过氧化氢酶(CAT)测定:参照紫外吸收法。取幼苗顶端完全展开的第一片成熟叶片, 称重后放入研钵中,加入少量石英砂和4下预冷的pH=7.0的磷酸缓冲液2-3mL,研磨成 匀浆,倒入25mL容量瓶中,用磷酸缓冲液冲洗研钵,并定容至25mL。将混合均匀的容量 瓶放于5冰箱中静置10min,取出后将上部澄清液4000r/min离心15min,所得上清液为 过氧化氢酶粗提液,放于5"C冰箱保存备用。取4支10mL试管,2支测定,2支对照,分 别加入粗酶液0.2mL,磷酸缓冲液1.5mL,蒸馏水1.0mL,其中对照管加入的酶液为煮沸的 东北林业大学硕士学位论文 酶液。25预热后,加入0.1mol L.1的H2020.3mL,开始计时并迅速倒入石英比色皿中,用 紫外分光光度计测定240nm下吸光度,每隔lmin记录一次读数,共测定4rnin,测定时重 复3次,计算出过氧化氢酶的活性。 过氧化物酶(PoD)测定:参照愈创木酚法。取幼苗顶端完全展开的第一片成熟叶片,称 重后放入研钵中,加入pH=5.5磷酸缓冲液适量研磨成匀浆,倒入至5mL离心管中,以 4000r/min离心10min,将上清液倒入容量瓶中定容至25mL。以加热煮沸5min的酶液为对 照,在0.1mL酶液中加入0.05mol/L磷酸缓冲溶液2.9lL;质量分数为2%的H2021.0mE: 0.05 mol/L愈创木酚1.0mL,立即放入37水浴中保温15min,迅速转入冰浴中,并加入质 量分数为20%的三氯乙酸2.0mL终止其反应,过滤后做适当稀释,用分光光度计测定 470nm波长吸光度,测定时重复3次,计算出过氧化物酶的活性。 2.3 13.蜕皮甾酮的提取及含量测定一 2.3.1试验材料与药品p.蜕皮甾酮标准品(中国药品生物制品检定所),含量芝99%。 2.3.2仪器设备与试剂 jt%2-2仪器型号及生产厂家 Tab.2-2 Apparatus modelandtheirmanufacturer 2.3.3试验方法 色谱条件:流动相(甲醇:水=50:50);柱温:室温;流速:0.8mL/min:检测波长: 242nm。 标准溶液:精密称取肛蜕皮甾酮标准品3mg,用甲醇定容于25mL容量瓶中,超声波 2材料与方法 混匀,得B.蜕皮甾酮标准液(0.12mg/mL)。 样品溶液:取新鲜样品于65烘干至恒重后研磨,称取29样品放入50mL锥形瓶中加

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  因为花的颜色很红且开出的花像口红,所以被称为口红吊兰,在家中长的茂盛的话会十分好看。口红吊兰比较适合在半阴环境,在夏天放在阳台下散射,其他季节可放在太阳下。吊兰是在15到25度生长最适宜其生长,夏季一旦高于30度以上,叶片容易干件,这是产生的不良后果,尤其是在暴晒的环境下,那么冬季5度以下,甚至零度以下的时候,那么很容易造成植株的枯萎,这一点北方的花友们要特别注意,冬季把口红吊兰搬到室内。和普通吊兰一样的是,盆土要经常处于湿润的情况,但是不让它积水。

  虎耳草是中国土生土长的植物,以其别具一格的外形和茫茫多的功效而闻名于世,它不仅能够作为观花、观叶植物...

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